SARS-CoV-2 вирусына байланысты COVID-19 ауруы деп аталатын ауыр жіті респираторлық синдром тыныс алу тамшылары мен жақын байланыстар арқылы таралатыны белгілі.[1]COVID-19 ауыртпалығы Ломбардия мен По алқабында (Солтүстік Италия)[2] өте ауыр болды, бұл аймақ адам денсаулығына теріс әсер ететіні белгілі бөлшектердің жоғары концентрациясымен сипатталады.[3]12 сәуірдегі Италия үшін қол жетімді аймақтық көрсеткіштер қазіргі уақытта оң адамдардың шамамен 30% әлі де Ломбардияда тұратынын көрсетеді (эпидемияның басынан расталған жалпы жағдайларды ескерсек, шамамен 40%), одан кейін Эмилия Романья (13,5%). , Пьемонт (10,5%) және Венето (10%).[2]По алқабының осы төрт аймағы Италияда тіркелген жалпы өлімнің 80% және реанимация бөлімшелеріне түскендердің 65% құрайды.[2]
Гарвард қоғамдық денсаулық мектебі жүргізген зерттеу АҚШ-тағы COVID-19 салдарынан PM концентрациясының жоғарылауы мен өлім-жітім деңгейі арасындағы байланысты растайтын сияқты[4] Алдыңғы хабарламаларда біз SARS-CoV-2 ықтималдығын болжадық. вирус инфекцияның таралуы кезінде бөлшектерде (PM) болуы мүмкін, [5,6] дәлелдемелерге сәйкес
басқа вирустар үшін қол жетімді.[7-15] Дегенмен, ауадағы ПМ-мен байланысты микробиома мәселесі, әсіресе қалалық ортада, негізінен әлі зерттелмеген, [16] және – қазіргі уақытта – ешкім әлі де арнайы бағытталған эксперименттік зерттеулер жүргізген жоқ. PM-де SARS-CoV-2 болуын растау немесе жоққа шығару кезінде.
Мұнда біз Бергамо провинциясының өнеркәсіптік алаңынан 21 ақпаннан наурызға дейін үздіксіз 3 апталық кезеңде екі түрлі ауа сынамаларымен жиналған PM10 сыртқы/ауадағы 34 PM10 үлгісіне жүргізген талдаулардың алғашқы нәтижелерін ұсынамыз. 13-ші.
Пан және т.б. сипаттаған әдістемеге сәйкес.2019 жылы (ауадағы вирустарды жинау, бөлшектердің мөлшерін анықтау және анықтау үшін),[17] PM үлгілері EN12341 анықтамалық әдісіне сәйкес төмен көлемді гравиметриялық ауа сынамасын (23 сағат бойы 38,3 л/мин) пайдалану арқылы кварц талшықты сүзгілерінде жиналды. :2014 PM10 мониторингі үшін.Бөлшектер 99,9% тән сүзгілерде ұсталдыаэрозольді ұстап тұру, дұрыс сақталады және Триест университетінің қолданбалы және салыстырмалы геномика зертханасына жеткізіледі.ДНҚ полимераза ингибиторларына бай үлгінің «қоршаған орта» сипатын ескере отырып, біз сүзгілердің түріне бейімделген Quick RNA фекальды топырақ микроб жинағын пайдалану арқылы РНҚ экстракциясын жалғастырдық.[18]Жартылай сүзгінің үстіңгі жағы ішке қаратып оралған,5 мл полипропилен түтікте жинақта берілген моншақтармен бірге.Бастапқы 1 мл лизисбуферден біз шамамен 400 мл ерітінді ала алдық, содан кейін ол стандартты хаттамалармен анықталғандай өңделді, нәтижесінде 15 ul соңғы элюат алынды.Кейіннен SARS-CoV-2 сынағы үшін 5 ul қолданылды.Үлгінің нақты шығу тегін ескере отырып, qScript XLT 1-Step RT-qPCR ToughMix пайдаланылды.[19]Күшейту жүйелері ДДҰ веб-сайтында жарияланған Корман және басқалары әзірлеген хаттаманың жүйелері болды [20].
Сынақ қатты бөлшектерде SARS-CoV-2 РНҚ бар екенін растауға немесе жоққа шығаруға бағытталған.Бірінші талдау молекулалық маркер ретінде «E генін» қолданды және Ct 36-38 цикл арасында болса да, 16 фильтрдің 15-інде әсерлі оң нәтиже берді.
Осыдан кейін біз SARS-CoV-2 үшін жоғары спецификалық болып табылатын молекулалық маркер ретінде «RtDR генін» пайдалану арқылы 6 оң сүзгіге («Е геніне» оң) талдауды қайталадық – 5 маңызды нәтижеге жетті. позитивтілік;жалған позитивті болдырмау үшін бақылау сынақтары да сәтті орындалды (1-сурет).
Қол жетімді сынама алу материалының таусылуына жол бермеу үшін қалған алынған РНҚ жергілікті университет ауруханасына (Италия үкіметі SARS-CoV-2 диагностикалық сынақтарын жүргізуге рұқсат берген клиникалық орталықтардың бірі) екінші сынақты орындау үшін жеткізілді. параллельді соқыр сынақ.Бұл екінші клиникалық зертхана E, N және RdRP гендеріне арналған 34 РНҚ экстракциясын сынады, кем дегенде үш маркер генінің біреуі үшін 7 оң нәтижені хабарлады, оңдылығы барлық үш маркер үшін бөлек расталды (Cурет 2).Үлгінің сипатына байланысты және сынама алу клиникалық диагностикалық мақсаттар үшін емес, қоршаған ортаны ластау сынақтары үшін жүргізілгенін ескере отырып (сонымен қатар, сүзгілердің молекулалық-генетикалық талдаулардан өткенге дейін кемінде төрт апта сақталғанын ескере отырып)итальяндық өшірудің салдары), біз 8 сүзгіде жоғары спецификалық «RtDR генін» анықтау арқылы SARS-CoV-2 вирустық РНҚ бар екенін дәлелдей аламыз.Дегенмен, сүзгілерден алынған қосымша материалдардың болмауына байланысты біз барлық 3 молекулалық маркер үшін бір уақытта оңды көрсету үшін сынақтардың жеткілікті санын қайталай алмадық.
Бұл SARS-CoV-2 РНҚ сыртқы бөлшектерде болуы мүмкін екендігінің алғашқы алдын ала дәлелі, осылайша атмосфералық тұрақтылық және PM жоғары концентрациясы жағдайында SARS-CoV-2 сыртқы PM бар кластерлерді жасай алады және – арқылы – олардың диффузиялық коэффициентін төмендету – атмосферада вирустың тұрақтылығын күшейтеді.Бұл алдын ала растауларДәлелдер жалғасуда және SARS-CoV-2 өміршеңдігі туралы нақты уақыттағы бағалауды, сондай-ақ оның бөлшектерге адсорбцияланған кездегі вируленттілігін қамтуы керек.Қазіргі уақытта PM-де вирустың болуы мен COVID-19 індетінің дамуы арасындағы корреляцияға қатысты ешқандай болжам жасауға болмайды.Арнайы шешілетін басқа мәселелер, сайып келгенде, PM орташа концентрациясыжұқпалы аурудың әлеуетті «күшейтетін әсері» үшін қажет (егер PM вирустық тамшылар ядролары үшін «тасымалдаушы» ретінде әрекет етуі мүмкін екендігі расталған жағдайда) немесе тіпті PM-нің төменгі шегінде минималды дозаның әсерінен иммунизациялаудың теориялық мүмкіндігі. .
1-сурет E (A) және RdRP гендерінің (B) күшейту қисықтары: жасыл сызықтар тексерілген сүзгілерді көрсетеді;көлденең сызықтаранықтамалық сүзгі алуды білдіреді;қызыл сызықтар оң үлгілердің күшейтілуін білдіреді.
2-сурет.Барлық 34 PM10 үлгісі үшін алынған E, N және RdRP гендері үшін оң нәтижелер (X белгісімен белгіленген)екінші параллельдік талдауларда сыналған сүзгілер.
Леонардо Сетти1, Фабрицио Пассарини2, Джанлуиджи Де Дженнаро3, Пьерлуиджи Барбьери4, Мария Грациа Перроне5, Массимо Борелли6, Жоланда Палмисани3, Алессиа Ди Гилио3, Валентина Торболи6, Альберто Паллавичини6, Маурицио А.Паллавичини8, Маурицио А.
1. Өнеркәсіптік химия бөлімі, Болонья университеті, Виале дель Рисоргименто – 4, I-40136, Болонья, Италия
e-mail: leonardo.setti@unibo.it
2. «Жаңартылатын көздер, қоршаған орта, көгілдір өсу, энергия» өнеркәсіптік зерттеулердің ведомствоаралық орталығы
University of Bologna, Rimini, Italy e-mail: fabrizio.passarini@unibo.it
3. «Альдо Моро» Бари университеті, Биология факультеті, Бари, Италия
e-mail: gianluigi.degennaro@uniba.it; alessia.digilio@uniba.it; jolanda.palmisani@uniba.it
4. Химия және фармацевтикалық ғылымдар кафедрасы, Триест университеті, Триест, Италия
e-mail: barbierp@units.it
5. Қоршаған ортаны зерттеу бөлімі, TCR TECORA, Милан, Италия
e-mail: mariagrazia.perrone@tcrtecora.com
6. Өмір туралы ғылымдар бөлімі – Триест университеті, Триест, Италия
e-mail: borelli@units.it; torboli@units.it; pallavic@units.it
7. Джулиано Исонтина университеттік ауруханасының зертханалық медицина бөлімі (ASU GI), Триест, Италия
email: maurizio.ruscio@asugi.sanita.fvg.it
8. Итальяндық экологиялық медицина қоғамы (SIMA), Милан, Италия
e-mail: priscofreedom@hotmail.com; alessandro.miani@unimi.it
9. Милан университеті, Милан, Италия, Қоршаған орта туралы ғылым және саясат бөлімі
e-mail: priscofreedom@hotmail.com; alessandro.miani@unimi.it
Корреспондент автор:
Леонардо Сетти, Department of Industrial Chemistry, University of Bologna Viale del Risorgimento 4, 40136, Bologna, Italy; e-mail: leonardo.setti@unibo.it
Анықтамалар
1. Дүниежүзілік денсаулық сақтау ұйымы, COVID-19 тудыратын вирустың берілу жолдары: IPC сақтық шаралары бойынша ұсыныстарға салдары, Ғылыми қысқаша ақпарат;қол жетімді: https://www.who.int/newsroom/commentaries/detail/modes-of-transmission-of-virus-causing-covid-19-implications-for-ipcprecaution-recommendations (29 наурыз 2020 ж.)
2. Италия Денсаулық сақтау министрлігі, Италиядағы Ковид-19 індеті туралы күнделікті бюллетень, http://www.salute.gov.it/imgs/C_17_notizie_4451_0_file.pdf мекенжайында қол жетімді
3. EEA, Еуропалық қоршаған ортаны қорғау агенттігі, Еуропадағы ауа сапасы 2019 есебі;№ 10/2019;Еуропалық қоршаған ортаны қорғау агенттігі: Копенгаген, Дания, қол жетімді: https://www.eea.europa.eu/publications/airquality-in-europe-2019
4. Xiao Wu, Rachel C. Nethery, M. Benjamin Sabath, Danielle Braun, Francesca Dominici, Exposure of airbution and COVID-19 in the United States, қолжетімді: https://projects.iq.harvard.edu/ files/covid-pm/files/pm_and_covid_mortality.pdf
5. Итальяндық экологиялық медицина қоғамы (SIMA), позициялық қағаз бөлшектері және COVID-19,
қол жетімді: http://www.simaonlus.it/wpsima/wp-content/uploads/2020/03/COVID_19_positionpaper_KAZ.pdf
6. Сетти Л., Пассарини Ф., Де Дженнаро Г., Барбиери П., Перроне М.Г., Пьяцзалунга А., Борелли М., Палмисани Дж., Ди Гилио А, Писцителли П, Миани А., Ақылға қонымды рөл бар ма Солтүстік Италияда COVID-19 таралуындағы бөлшектердің бөлшектері үшін?, BMJ Rapid Responses, 2020 жылғы 8 сәуір, мына мекенжайда қол жетімді: https://www.bmj.com/content/368/bmj.m1103/rapid-responses
7. Sedlmaier, N., Hoppenheidt, K., Krist, H., Lehmann, S., Lang, H., Buttner, M. Құс тұмауы вирусының (AIV) генерациясы ластанған фекальды ұсақ бөлшектердің (PM2.5): геномды және жұқпалылықты анықтау және иммиссияны есептеу.Ветеринариялық микробиология.139, 156-164 (2009)
8. Чжао, Ю., Ричардсон, Б., Такл, Э., Чай, Л., Шмитт, Д., Вин, Х. 2015 жылы құс тұмауының жоғары патогенді ошақтарының таралуында ауа-тамшылы арқылы таралу рөл атқарған болуы мүмкін. АҚШ.Sci Rep. 9, 11755. https://doi.org/10.1038/s41598-019-47788-z (2019)
9. Ма, Ю., Чжоу, Дж., Янг, С., Чжао, Ю., Чжэн, X. Батыс Қытайдағы қызылша ауруына шаң оқиғаларының әсерін бағалау.Атмосфералық орта.157, 1-9 (2017)
10. Sorensen, JH, Mackay, DKJ, Jensen, C. Ø., Donaldson, AI. Аусыл эпидемиясы вирусының атмосфералық таралуын болжауға арналған интеграцияланған модель.Инфекция., 124, 577–590 (2000)
11. Глостера, Дж., Александрсен, С. Жаңа бағыттар: Аусыл вирусының атмосфералық ортамен таралуы, 38 (3), 503-505 (2004)
12. Рече, И., Д'Орта, Г., Младенов, Н., Вингет, ДМ, Саттл, CA Атмосфералық шекаралық қабат үстінде вирустар мен бактериялардың шөгу жылдамдығы.ISME журналы.12, 1154-1162 (2018 ж.)
13. Цинь, Н., Лян, П., Ву, Ц., Ван, Г., Сю, К., Сионг, X., Ван, Т., Золфо, М., Сегата, Н., Цинь, Н. ., Найт, Р., Гилберт, Ж.А., Жу, ТФ Мегаполистегі бөлшектермен байланысты микробиоманың бойлық шолуы.Геномдық биология.21, 55 (2020)
14. Чжао, Ю., Ричардсон, Б., Такл, Э., Чай, Л., Шмитт, Д., Вин, Х. Әуе арқылы тасымалдануы мүмкін.
2015 жылы Америка Құрама Штаттарында құс тұмауының жоғары патогенді індетінің таралуында рөл атқарды.Ғылым
9 өкіл, 11755. https://doi.org/10.1038/s41598-019-47788-z (2019)
15. Ма, Ю., Чжоу, Дж., Янг, С., Чжао, Ю., Чжэн, X. Батыс Қытайдағы қызылша ауруына шаң оқиғаларының әсерін бағалау.Атмосфералық орта.157, 1-9 (2017)
16. Цзян, В., Лаинг, П., Ван, Б., Фанг, Дж., Ланг, Дж., Тиан, Г., Цзян, Дж., Чжу, ТФ Оңтайландырылған ДНҚ экстракциясы және ауадағы микробтық қауымдастықтардың метагеномдық реттілігі .Нат.Проток.10, 768-779 (2015 ж.)
17. Pan, M., Lednicky, JA, Wu, C.-Y., Ауадағы вирустарды жинау, бөлшектердің мөлшерін анықтау және анықтау.Қолданбалы микробиология журналы, 127, 1596-1611 (2019)
18. Zymoresearch Ldt, өнім сипаттамасы, мына мекенжайда қолжетімді: https://www.zymoresearch.com/products/quick-rnafecal-soil-microbe microprep-kit
19. Quantabio Ltd, өнімнің сипаттамасы, мына мекенжайда қолжетімді: https://www.quantabio.com/qscript-xlt-1-steprt-qpcr-toughmix
20. Корман, В.М., Ландт, О., Кайзер, М., Моленкамп, Р., Мейжер, А., Чу, ДК және Мульдерс, DG (2020).
2019 жылғы жаңа коронавирусты (2019-nCoV) нақты уақыттағы RT-ПТР арқылы анықтау.Eurosurveillance, 25(3), мына мекенжайда қол жетімді:.https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC6988269/
Түпнұсқа: https://doi.org/10.1101/2020.04.15.20065995
Жіберу уақыты: 18 сәуір 2020 ж